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ImmunoChemistry艾美捷细胞内GSH测定试剂盒方案

2022-11-24 21:47:11Sylvia_sc

用ImmunoChemistry艾美捷细胞内GSH测定评估细胞内谷胱甘肽水平的变化。这种全细胞谷胱甘肽测定采用专有的硫醇敏感染料ThioBright 绿色,以监测游离形式谷胱甘肽(即GSH)浓度的相对变化。通过流式细胞术分析荧光信号。

谷-胱-甘肽,γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸甘氨酸或GSH,是细胞中最丰富的非蛋白质硫醇。GSH参与细胞内许多重要生化过程的调节。GSH最初被认为是对抗自由基副产物的毒性积累的关键细胞内还原力来源,它还参与解毒和清除外源/内源性毒素和烷化剂。GSH作为一种细胞信号剂,参与DNA合成和细胞增殖调节。由于细胞死亡的遗传保守分子过程,细胞内GSH水平可通过细胞凋亡(细胞内足够的GSH储存)或坏死或自噬(细胞内耗尽的GSH存储)促进细胞死亡途径。检测到实验细胞群体中细胞内GSH浓度相对于阴性(健康细胞)对照的下降通常表明细胞凋亡诱导事件。由于细胞内GSH耗竭与细胞凋亡过程的发生之间存在着强烈的相关性,ImmunoChemistry(ICT)的细胞内GSH-Assay为评估细胞凋亡抑制剂和激活剂的效力提供了良好的筛选选择。该试剂盒提供了所有必要的试剂和易于遵循的方案,以使用流式细胞术分析方法评估细胞内GSH水平的变化。关键分析试剂是专有的硫醇敏感染料ThioBright 绿色,它能快速穿透细胞膜结构,主要聚集在活细胞的胞浆中。在含有游离硫醇的分子如GSH的存在下 绿色染料分子与GSH靶分子共价结合,并转化为荧光形式的染料。在与细胞死亡过程相关的氧化应激或GSH耗竭期间,绿色荧光染料形式的胞浆浓度显著降低。细胞内GSH浓度的降低直接转化为死亡或氧化应激细胞群中绿色荧光输出的容易监测的降低。

ImmunoChemistry艾美捷细胞内GSH测定试剂盒化学性质:

目标谷胱甘肽(GSH)

分析方法流式细胞术

样品类型细胞培养

储存-20°C

协议:

准备样品和对照品。

重组ThioBright 用500µL二甲基亚砜(DMSO)制成绿色,产生200X浓缩原液。

以1:200的比例向每个样品中添加ThioBright Green。例如,向995µL培养细胞中添加5µL。

培养15-30分钟。

可选:旋转和沉淀细胞,去除上清液,并轻轻重悬于测定缓冲液或其他等渗缓冲液中。

如果需要,用其他污渍标记,如Hoechst、碘化丙啶、7-AAD或抗体。

用流式细胞仪分析。硫亮绿在490 nm激发,在525 nm发射。

ImmunoChemistry艾美捷细胞内GSH测定试剂盒组分:

ThioBright Green, 1 vial, #6636

Assay Buffer, 100 mL, #6637

DMSO, 500 µL, #6638

Kit Manual

 

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